摘 要

油茶（Camellia oleifera ）属山茶科（Theaceae）山茶属（Camellia），喜温喜湿，异花授粉，适用性广，经济效益高，具有很高的综合利用价值。传统油茶类型划分主要依据其形态学特征、生物学特征和经济性状导致同名异物、同物异名的现象经常发生；当前油茶分类混乱，使得引种盲目,在油茶优良无性系良种推广过程中种质是否真实成为严峻的问题,迫切需要研究油茶遗传多样性，开发出油茶品系鉴定的分子依据。通过SSR标记运用于构建油茶指纹图谱，可以检测品种是否只具有该品种特有的标记指纹片段，有效地鉴定品种纯度与真伪，并且可以分析各油茶栽培品种遗传多样性，可为油茶分子标记辅助选择育种提供新的分子依据，具有现实意义。

关键词：油茶;ssr;分子标记;DNA指纹图谱

Molecular Identification of Clonal Oil Tea

(Camellia oleifera) cultivar

ABSTRACT:Oil Tea(Camellia oleifera) which is warm-like and moist-like belongs to cross pollination plants，it is a section in the genus Camellia, Theaceae. Oil Tea is wide applicability and has high economic efficiency, high comprehensive utilization value. The traditionnal classification method of Oil Tea concentrates on morphological characteristics, biological characteristics and economic characteristics. The phenomena of homonym and synonymy offen happens,result in confusion on classification and the blind introducing variety of Oil Tea. On the process of popularizeing improved Clonal Oil Tea(Camellia oleifera) cultivar, germplasm authenticity has became a serious problem. Researching on genetic diversity and developing molecular gist of line identification of Oil Tea has became impendency increasingly. We can construct Oil Tea(Camellia oleifera) DNA Fingerprints by ssr molecularmarker to test wheather a variety has corresponding proper fingerprints Fragment,to identify its pureness and authenticity and analyse Genetic Diversity in Oil Tea(Camellia oleifera) cultivar. Oil Tea(Camellia oleifera) DNA Fingerprints can provide new molecular gist for molecular marker assisted breeding,that has practical significance.

Key words: Camellia oleifera;SSR;molecularmarker; DNA Fingerprints

目 录

1 文献综述 - 3 -

1.1油茶概况 - 3 -

1.1.1生物学特性及生态习性 - 3 -

1.1.2 油茶良种选育进展 - 3 -

1.2油茶多样性研究进展 - 4 -

1.2.1 遗传多样性研究 - 4 -

1.2.2 品种指纹图谱构建与种质甄别 - 4 -

1.3 SSR标记开发 - 5 -

1.3.1 SSR特点及开发原理 - 5 -

1.3.2 SSR标记在指纹图谱构建中的应用 - 6 -

1.3.3 SSR引物的通用性研究 - 6 -

1.4研究前景展望 - 7 -

1.4.1研究意义 - 7 -

1.4.2特色性与开创性 - 7 -

2材料与方法 - 8 -

2.1实验材料 - 8 -

2.1.1引物通用性效率检测试验材料 - 8 -

2.1.2构建油茶栽培品种指纹材料来源 - 8 -

2.2实验方法 - 8 -

2.2.1 DNA提取 - 8 -

2.2.2 SSR引物设计 - 9 -

2.2.3 SSR-PCR反应体系的建立及电泳检测 - 9 -

2.2.4 SSR引物的通用效率检测 - 9 -

2.2.5油茶无性系SSR指纹图谱构建 - 9 -

2.2.5.1材料 - 9 -

2.2.5.2方法 - 10 -

3结果与分析 - 10 -

3.1 DNA的质量控制与分析 - 10 -

3.2油茶SSR引物通用效率比较 - 11 -

3.3 43个油茶栽培品种的SSR指纹构建 - 12 -

3.3.1 SSR指纹构建用引物 - 12 -

3.3.2 43个油茶栽培品种的指纹图谱 - 12 -

4讨论 - 16 -

4.1用于微卫星开发DNA序列的处理 - 16 -

4.2 SSR标记的通用性比较分析 - 16 -

4.3油茶主栽品种的指纹构建 - 17 -

4.4油茶SSR应用前景展望 - 17 -

致谢 - 18 -

参考文献 - 19 -

1 文献综述

1.1油茶概况

1.1.1生物学特性及生态习性

油茶是我国重要的经济木本油料树种之一，栽培历史悠久、分布广泛，我国生产上通称的油茶是指山茶属中种子含油率较高、有栽培应用价值的一批物种的总称,为常绿小乔木或灌木。油茶喜温暖湿润气候，要求年平均气温14-21℃，年平均降雨量在1000毫米以上，且四季分配均匀，日照1800-2200小时。对土壤要求不严，适应性很强，能耐较瘠薄的土壤，在pH值4.5—6.5之间的酸性、微酸性的红壤或黄壤上均可正常生长发育，碱性土不宜种植。 油茶有春梢、夏梢和秋梢。春梢在3月中旬开始生长，5月中旬基本结束；夏梢在5月中旬开始生长，7月中旬终止，二次夏梢7月中旬至8月下旬；秋梢始于9月上旬，到11月下旬终止。油茶顶端优势明显，顶芽萌发力最高，生机最旺，所萌发的顶春梢较腋芽所萌发的侧春梢生长量大，壮实，花芽分化率及座果率也较高。成年阶段的油茶，营养生长和生殖生长并存，春梢是开花座果的枝条，夏梢一般不能孕蕾着果。油茶叶面积的大小与花芽分化及座果有关。单枝有3片以上叶才能形成花芽，开花着果；全株每果平均有叶15－20片才能保证稳产。叶片过少，翌年必然出现小年。

油茶花芽4月份开始在当年春梢上分化，9月中、下旬开始开花，10月中下旬为盛花期。油茶的花为两性花，异花授粉，孤雌不能生殖，自花授粉不孕或可孕率很低。花朵盛开期的当天和第二天授粉受精的成果率最高。油茶花的传粉媒介主要靠昆虫。2月下旬至9月上旬为果实生长期，10月上、中旬果实成熟。油茶花期正是上年所结果实的初熟期，形成花果并存的奇特现象，群众称之为“抱子怀胎”。油茶为深根性树种，根系的生长具有强烈的趋水趋肥性，有较强愈合力和再生力。油茶的生长发育需要充足的光照条件，阳坡的油茶较阴坡油茶产量高，含油率高。低丘坡向对油茶影响不大。油茶花期降雨则不利授粉。农历7--8月对水分要求迫切，故农谚云“七月落金、八月落银，十月开花要天晴”。

1.1.2 油茶良种选育进展

由于长时期无人工选择参与，油茶林分品种(类型)混杂。从林分群体产量结构而言，服从指数分布，即丰产株比例极低(一般占林分的10％～15％)，低产株比例大(占林分的60％～80％)，全林分70％～80％的产量由20％～30％的植株承担(徐林初,龚春和高璜，2005)。针对油茶林的产量普遍不高情况，早在20世纪70年代末，油茶育种工作者开展了油茶良种的选育工作, 通过调查预选、初选、复选和决选四个必要的步骤，在全国范围内先后共选出了油茶优树5000多株，当时由中国林科院亚林所、湖南省林科所、江西省林科所和广西自治区林科所为骨干的全国油茶攻关协作组集中其中的1600株，以大树换冠法营建油茶优树收集圃153 hm²，为油茶育种奠定充实的材料基础。直到目前，全国已选出180多个油茶优良无性系，油茶优良无性系具有早实、丰产和稳产的特点，现在已成为我国油茶生产上最重要的良种资源，如湖南“湘林系列”、江西“赣无系列”已在南方油茶主产区普遍推广应用。我国油茶主产区集中分布在湖南、江西、广西、浙江、福建、广东、湖北、贵州、安徽、云南、重庆、河南、四川和陕西14 个省( 区、市)的642个县( 市、区)，共有油茶林面积302 万hm²，其中湖南、江西、广西3 省( 区) 种植面积较大，分别为119万hm²、75万hm²和37万hm²，合计占全国现有油茶林总面积的76.2%（王斌等，2011）。

1.2油茶多样性研究进展

1.2.1 遗传多样性研究

植物遗传多样性研究是植物种质资源保护及开发利用的基础。对当前优良品种的遗传多样性进行准确的评价可以为亲本选配、后代遗传变异程度及杂种优势水平的预测提供预见性的指导,是关系到育种目标能否成功实现的关键。