摘 要

以六角果鸢尾幼嫩的根状茎为外植体材料,诱导出愈伤组织并进行盐胁迫处理，试图筛选出稳定的可遗传的愈伤组织突变体系。研究结果表明：1）在培养基为MS 1.0mg/L6-BA 0.1mg/L NAA 1.0mg/L KT 1.0mg/L2,4-D时，愈伤组织的诱导率最高；2）在培养基为N6 1mg/L2,4-D 1mg/L KT 200mg/LCH 250mg/L Pro 10mg/L VitB1时，愈伤组织的增殖效果最好；3）通过逐步正筛选法和一步正筛选法确定愈伤组织的耐盐临界浓度为1.4%，并且通过无压力回复测试以及相关生理生化指标进行测定分析，初步证明其具有耐盐性。由本试验结果可知，通过耐盐筛选可以获得具有一定耐盐型的愈伤组织，为诱导分化获得耐盐型突变体提供基础材料。

关键词：六角果鸢尾；根状茎；愈伤组织；NaCl胁迫

The selection of the mutants of Iris hexagona under salt stress and the response under salt stress

Abstract：Using young rhizomes of Iris hexagona, we induced the callus to be treated with different NaCl concentration, and tried to selecthe stable heritable salt-tolerant callus mutation system. The specific results were shown as follows: 1) The callus induction rate would be the highest when the hormone combination was 1.0mg/L6-BA 0.1mg/L NAA 1.0mg/L KT 1.0mg/L2,4-D in MS medium. 2) The effect of callus reproduce would be the best when the hormone combination was N6 1mg/L2,4-D 1mg/L KT 200mg/LCH 250mg/L Pro 10mg/L VitB1. 3）Using the gradually screening method and one-step screening method, we found out the critical concentration of the salt-tolerant calluses was 1.4%. The physiological and biochemical indexes also shows that the salt-tolerant trait of these mutants was genetically stable. It was indicated that the salt-tolerant calluses could be selected by screening its calluses, and the salt-tolerant calluses could be the basic differentiation material of salt tolerant mutant.

Key words: Iris hexagona; Rhizome ; Callus ; Salt Stress

目 录

1 实验方法 4

1.1实验材料： 4

1.2实验方法： 4

1.2.1外植体的消毒 4

1.2.2 茎愈伤组织的诱导 4

1.2.3 茎愈伤组织的增殖 5

1.2.4 耐盐型愈伤组织的筛选及稳定性鉴定 5

1.2.5 NaCl胁迫下六角果鸢尾愈伤组织生理生化特征测定分析 6

1.2.6 数据分析处理 7

2 实验结果 7

2.1 外植体最佳消毒时间的确定 7

2.2 茎愈伤组织诱导的基本培养基及最适激素配比筛选 8

2.3 茎愈伤组织的增殖 10

2.4 耐盐突变体的筛选及耐盐稳定性鉴定 10

2.5 NaCl胁迫下六角果鸢尾愈伤组织生理生化特征 13

3 讨论 13

3.1 外植体无菌体系的建立 13

3.2 茎愈伤组织诱导时基本培养基和激素的配比的筛选 14

3.3 茎愈伤组织耐盐突变的筛选及稳定性鉴定 14

3.4 NaCl胁迫条件下六角果鸢尾愈伤组织的生理响应 15

3.4.1 NaCl胁迫对六角果鸢尾愈伤组织可溶性糖和可溶性蛋白含量的影响 15

3.4.2 NaCl胁迫对六角果鸢尾愈伤组织内保护酶活性的影响 15

3.4.3 NaCl胁迫对六角果鸢尾愈伤组织丙二醛含量的影响 15

致 谢 17

参考文献 18

前 言

在众多路易斯安那鸢尾中，六角果鸢尾（Iris hexagona）分布最为广泛，因此其既可以在淡水中生存也可以在海水中生存^[1]，是研究NaCl胁迫适应性的理想模式植物。迄今为止，人们已经对针对六角果鸢尾的耐盐性状在其生理特征，生化反应方面进行了大量的研究^[2,3,4]，并且致力于寻找六角果鸢尾在基因水平上的耐盐依据，但六角果鸢尾组培技术体系方面的研究尚未完善。为此，笔者拟以其幼嫩根状茎为材料，建立愈伤组织诱导,并拟筛选耐盐型愈伤组织，研究结果对六角果鸢尾种质资源的保护、开发与利用，以及利用生物技术对其进行遗传改良具有十分重大的意义。

1 实验方法

1.1实验材料：

田间长势良好的六角果鸢尾幼嫩根状茎。

1.2实验方法：

1.2.1外植体的消毒

剪取六角果鸢尾幼嫩的根状茎，用流水将外植体分别清洗干净(1～2h)，冲洗干净后用洗洁精溶液浸泡茎搅拌消毒10min，冲洗干净后再用蒸馏水冲洗，之后置超净工作台上。。先加入75%的酒精浸泡30s，无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞分别消毒13min、15min、17min, 无菌水冲洗5次， 将其置于无菌瓶中，用解剖刀从节间部位切取合适大小的外植体块，用于接种。每瓶培养基接2～3个，每一种接10瓶，共30瓶。

污染率（%）=（污染的外植体数/接种的外植体总数）×100%

死亡率（%）=（未污染的外植体死亡数/接种外植体总数）×100%

成活率（%）=（成活外植体数/接种外植体总数）×100%

1.2.2 茎愈伤组织的诱导

经消毒后的外植体分别接入N6，MS，1/2MS三种培养基上，并另外加入0.2mg/L6-BA 0.2mg/L2,4-D，每个处理重复三次，每个培养瓶中接种3个外植体，20d后统计愈伤组织的诱导率。

确立最佳基本培养基后，将外植体接入添加了不同激素配比的MS培养基上。设计四因素、三水平、九种处理的正交试验(表1-1)。每个处理30瓶，每个培养瓶内接种3个外植体，重复3次。培养温度（25±2）℃，暗培养，20d后记录外植体生长情况及愈伤组织的诱导率。