摘 要

观音竹的愈伤组织细胞悬浮培养是将通过固体培养获得的愈伤组织进行适当分割后转接在悬浮液中进行细胞培养的技术，观音竹的细胞在悬浮液中以单细胞或小的细胞团形式存在。本研究通过观音竹悬浮培养研究，结论如下：

1、观音竹愈伤组织的悬浮培养结果表明，悬浮培养的最佳接种量为1.50g/40ml。

2、最佳接种时间为12~14天。愈伤组织在悬浮培养液中需要长达 12d 增殖速度才变快，较多的接种量虽能使愈伤组织增殖提前，但效果不明显，研究发现观音竹愈伤组织对外界条件反应不敏感且在悬浮培养条件下增殖速度慢。

关键词：观音竹 悬浮培养 最佳接种量 最佳接种时间

Abstract

Bambusa multiplex of callus cells in suspension culture callus culture obtained through the solid to the appropriate partition transfer in the suspension cell culture technology, Bambusa multiplex cells in the suspension of single cells or small cellThe group form of existence. Bambusa multiplex out the advantages of cell suspension cultures: cell growth is rapid, reproducible, easy to control, suitable for large-scale cultivation of suspended cell mass shape, size and state are roughly the same small group of normal cells by the dozens less cells, In addition, the obtained suspension cultures dispersion. The establishment of plant cell suspension cultures the Department of, can be for genetic operating for the carried out at the cellular level to provide the ideal materials.

By using Bambusa multiplex as explants ,a serial of works on suspension culture of Bambusa multiplex were conducted,and the results were:

Suspension culture of non-embryogenic callus showed that those callus began a relatively rapid proliferation rate after cultured 12d in liquid medium. Increase of inoculation amount could promote proliferation some degree but with no certain relation. The results demonstrated that the non-embryogenic callus were not sensitive to culture situation and proliferating slower under suspension culture.The optimal inoculation amount is 1.50g/40ml.The optimizing subculture time is 12~14 days.

Keyword: Bambusa multiplex ,uspension culture ,optimal inoculation amount , optimizing subculture time

目录

1文献综述 1

1.1竹类资源在林业中的地位 1

1.2研究的目的和意义 1

1.3组织培养简介 1

1.3.1组织培养发展概况 1

1.3.2植物组培的优点 2

1.3.3悬浮培养的优势 3

1.3.4国内外竹子组织培养研究现状 3

2实验材料与方法 7

2.1实验材料 7

2.1.1植物材料 7

2.1.2主要实验仪器、设备 7

2.1.3培养条件 8

2.2方法 8

2.2.1稳定悬浮系的建立 8

2.2.2 初始接种量的确定 9

2.2.3 悬浮系生长特性的测定 9

3结果与分析 9

3.1 稳定悬浮系的建立 9

3.2 接种量对悬浮细胞生长量的影响 9

3.3悬浮系生长特性的测定 10

4结论 11

5不足 11

致谢 13

参考文献 14

附录： 15

缩略词中英文对照表 15

任务书 16

1文献综述

1.1竹类资源在林业中的地位

竹子是最重要的植物之一，不仅有极高的经济价值，而且还有很好的生态价值。全世界大约有2000 万公顷的竹林，占世界森林资源的1%左右，而中国就有竹林 500 多万公顷，占到了世界总面积的 1/4。竹子生长迅速、可以利用多年、开发前景广、，健康环保，这些优点深受广大农民群众喜爱和各级政府部门的高度关注，竹业在我国各地区的快速发展，已经成为推动竹乡经济又好又快发展和农民增收致富的重要产业，是林业经济的“四大朝阳产业”之一。特别是在我国广大南方地区，竹子在很早以前就已经成为农民致富的重要经济树种。仅浙江省而言，大约有竹林 1175 万亩左右，从事和竹业相关的人员超过了 300万人次。竹类植物以其种类繁多、用途广泛而著称于世。但是竹子的两个特点：第一，生长周期长、开花难以预测；第二，很多竹种开花后就会死亡。这是竹子遗传改良工作中的重大难题。

观音竹(Bambusa multiplex)原产中国南部。喜温暖湿润和半阴环境，耐寒性稍差，不耐强光曝晒，怕渍水，宜肥沃、疏松和排水良好的壤土，冬季温度不能低于0℃。凤尾竹株丛密集，竹干矮小，枝叶秀丽，常用于盆栽观赏，点缀小庭院和居室，也常用于制作盆景或作为低矮绿篱材料。观音竹的叶、叶芽可入药，有清热除烦，清热利尿的功效。观音竹主要以分株繁殖。

1.2研究的目的和意义

竹类中的很多种存在花期难以预测，结实率低的问题，而且很多竹种开花后就会死亡，这使得竹子的杂交育种工作难有突破，近年来竹子育种基本停滞不前。生物技术在其中可以发挥巨大的推动作用，生物技术育种目标明确、周期较短。在生物技术研究中，有很重要的一项基础工作就是材料的制备，只有有了充足的实验材料，才能使研究工作顺利展开。本论文选择观音竹作为材料，通过对观音竹稳定悬浮系的建立与继代培养的探索，为竹子的分子育种、生理生化、发育生物学、竹子快繁、种质资源保存等提供基础材料的支持。

1.3组织培养简介

组织培养（tissue culture）是应用无菌操作方法培养生物的离体器官、组织或细胞，使其在人工条件下生长和发育的技术。

1.3.1组织培养发展概况

组织培养始19世纪后半叶，1839年Schwann提出每一个活细胞在适宜条件下都有独立发育成完整个体的潜能。1853年trecul利用离体的茎段和根段进行培养获得了愈伤组织。 1901年Morgan首次提出一个全能性细胞应具有发育出一个完整植株的能力。Haberlandt于1902年首次提出细胞培养的概念，也是第一个用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的人。他提出激素作用（leptohormone)的概念，与维管组织特别是韧皮部有关；另一类是创伤激素(woundhomone)，与细胞损伤有关，为后来激素理论的建立和在组织培养中的广泛应用奠定了基础。

1934年White、Nobecourt和Haberlandt分别发现的了B族维生素在组织培养中的重要作用，并使培养获得了成功。三人被誉为植物组织培养的奠基人。