摘 要

水松是我国特有的植物。由于自然历史因素和现代人类活动的影响，水松的个体数量日益减少，现已处于濒危状态，因此利用组织培养技术进行水松的快速繁殖，对其遗传资源的保护具有重要意义。

本研究以水松成年母树茎段为材料，对其组织培养体系进行研究，研究包括：外植体消毒、腋芽诱导、不定芽及不定根的诱导。结果表明：最合适的外植体表面消毒方法为用70%酒精浸泡30s后，较嫩茎段使用含0.5% Tween-80的HgCl₂两次分别浸泡5min和4min，较老茎段使用含0.5% Tween-80的HgCl₂两次分别浸泡5min，最后无菌水清洗7~8次，前者存活率最高，为28.1%；在腋芽诱导中，MS培养基添加0.05~0.2mg/L 6-BA均能有效诱导出腋芽，效果最好的方法为添加了0.1mg/L 6-BA的MS培养基，附加3%蔗糖，培养20d后腋芽萌动率为70.4%，腋芽增殖系数为2.148；不定芽及不定根诱导有待进一步研究。

关键词：水松 组织培养 外植体消毒 腋芽诱导

Abstract

Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K. Koch was an endemic species in China. Under the influence of natural history and activities of modern human beings, the individual number of Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K. Koch has decreased and now it is endangered. Therefore, studying on the utilization of tissue culture technique on this species is significant for the protection of its genetic resources.

Based on explants which were excised from adult trees, we have studied on the tissue culture system of Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K. Koch. The study includes: sterilization on explants; suitable condition of inducement of axiliary buds, adventitious buds and adventitious roots. The results are as follows. The optimum methods of explants sterilization were soaking explants in 70% alcohol for 30s, and then transferring them into 0.1% HgCl₂ which is containing 0.5% Tween-80. The younger stems were soaked for 5 and 4 min respectively, the older ones were soaked for 5 and 5 min respectively, and then washed by sterilized water for 7 to 8 times. Survival rate reached the highest by using the former method, which is 28.1%. MS medium with 6-BA 0.05~0.2mg·L^-1 was efficient in inducing axiliary buds. The better condition is using 6-BA 0.1mg·L^-1 in MS medium with 3% sugar, making the inductive rate reach 70.4% and the proliferation coefficient reach 2.148 after culturing for 20d. The optimum conditions of adventitious buds and adventitious roots inducement need a further study.

Key words: Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K. Koch, tissue culture, explants sterilization, axiliary buds inducement

目录

1文献综述 1

1.1水松的生物学特性和自然分布 1

1.1.1水松的生物学特性 1

1.1.2水松的自然分布 1

1.1.3水松的分类学研究 2

1.1.4水松的细胞学研究 2

1.2针叶树组织培养繁殖的研究概况 2

1.2.1针叶树组织培养外植体的种类选择和灭菌方法选择 2

1.2.1.1外植体的种类选择 2

1.2.1.2外植体的灭菌方法选择 3

1.2.2针叶植物组织培养中的培养基和激素浓度与组合 3

1.2.2.1基本培养基的选择 3

1.2.2.2激素的浓度与组合 4

1.3针叶树种植株再生途径的选择 4

1.3.1器官发生 4

1.3.2体细胞胚胎发生 5

1.4研究目的及意义 5

2材料与方法 6

2.1实验材料 6

2.1.1外植体消毒材料 6

2.1.2腋芽诱导材料 6

2.1.3不定芽、不定根诱导材料 6

2.2仪器与设备 6

2.3实验方法 6

2.3.1外植体消毒 6

2.3.1.1外植体消毒药品 6

2.1.1.2外植体消毒方法 6

2.3.2腋芽诱导 8

2.3.3不定芽分化诱导 8

2.3.4不定根诱导 8

2.3.5实验培养条件 8

2.4数据分析 9

3结果与分析 10

3.1外植体消毒 10

3.1.1不同消毒剂处理方法对消毒效果的影响 10

3.1.1.1不同处理时间对消毒效果的影响 10

3.1.1.2不同消毒方法对茎段消毒效果的影响 12

3.1.2不同年龄的茎段对消毒效果的影响 12

3.1.3不同外植体取材时间对消毒效果的影响 13

3.1.4 Tween-80对消毒效果的影响 13

3.1.5外植体表面消毒讨论 14

3.2腋芽诱导 14

3.2.1不同浓度BA对腋芽诱导的影响 14

3.2.2不同诱导时间对腋芽诱导的影响 16

3.2.3不同外植体部位对腋芽诱导的影响 17

3.2.4腋芽诱导讨论 18

3.3不定芽分化诱导 18

3.4不定根诱导 19

4 结论 20

致谢 21

参考文献 22

前言

植物组织培养技术利用了细胞的再生特性，通过人工可控的组织培养条件缩短繁殖材料个体的生长周期，提高繁殖系数，因其繁殖周期短，不收季节限制，可在短时间内大量繁殖以拯救濒危物种。

水松属于杉科水松属，是我国特有的单种属植物。由于自然历史因素和现代人类活动的影响，水松的个体数量日益减少，现已处于濒危状态，因此，开展水松遗传资源保护非常迫切。而利用组织培养技术进行水松的大量快速繁殖，对其保护具有重要意义。

1. 文献综述
   1. 水松的生物学特性和自然分布
      1. 水松的生物学特性

水松〔Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K. Koch〕为我国特产的孑遗树种^[1]，别名水莲、水帝松、水杉松、水极、长柏，属于杉科(Taxodiaceae)水松属(GlyPtostrobus)^[2]，由于自然历史因素和现代人类活动的影响，水松的个体数量日益减少，现已处于濒危状态，1999年国务院公布《国家重点保护野生植物名录(第一批)》中被列为一级保护植物^[3]。

水松为喜光树种，喜温暖湿润的气候及水湿的环境，树干基部膨大成柱槽状，并且有伸出土面或水面的吸收根。该树种对土壤的适应性较强，除盐碱土之外，在其他各种土壤上均能生长，而在水份较多的冲渍土上生长最好^[1]。在我国南亚热带温暖湿润的平原地带，水松主要沿着河岸、沼泽或水田边缘分布^[9]。